福建省动物疫病预防控制中心对下列政府采购项目进行公开招标(招标方式)*、招标文书编号：FJBY-********、招标项目内容：试剂耗材采购项目*、投标截标时间 **** 年 * 月 ** 日 **:** (北京时间)*、开标时间 **** 年 * 月 ** 日 **:** (北京时间)各潜在投标人：福******受福建省动物疫病预防控制中心委托对下列政府采购项目进行公开招标。项目编号为：FJBY-*******招标项目内容：试剂耗材采购项目原公告截标时间：****-*-** 上午*:** (北京时间)原公告开标时间：****-*-** 上午*:**（北京时间)采购人名称：福建省动物疫病预防控制中心地址：福建省 采购代理机构名称：福******地址：福州市北环西路左海科技大厦A座*层 联系方式：********-***原公告的采购项目名称：首次公告日期：****年*月**日现对招标文件内容进行如下更正通知：*、招标文件第*页的*-*口蹄疫抗体正向血凝预估数量（盒/包/袋）“***”更正为“**”，单价最高限价“***”更正为“****”。*、招标文件第*页的*-*猪瘟抗体正向血凝预估数量（盒/包/袋）“**”更正为“**”，单价最高限价“***”更正为“****”。*、原招标文件第**页至第**页“合同包*品目号*-*、*-*的品名及参数要求有误，现须进行更正说明，更正内容详见“附件”。*、招标文件第*页合同包*的投标保证金“*****.**”更正为“****.**”。*、投标人若有参加多个合同包项目的投标的须按合同包分别编制投标文件(每个合同包都须提供一份正本，四份副本，报价部分和商务技术部分须分开编制)。其他按原招标文件内容不变。本通知为FJBY-*******招标文件的组成部分，对投标人有约束力。请已购买招标文件的潜在投标人于****年**月**日**：**前传真（****-********）或回函确认本通知已收悉，否则后果自负。特此通知！福建省动物疫病预防控制中心****年**月**日 回 执福******：贵公司于****年**月**日通知的福建省动物疫病预防控制中心试剂耗材采购项目招标文件（招标文书编号：FJBY-*******）的更正通知（一）已收悉！特此回执接收单位： （盖章）****年 月 日附件：原招标文件内容更正后内容合同包*品目号*-*、*-*：口蹄疫I型/口蹄疫A型病毒抗体ELISA检测试剂盒 *.*检测目的：检测抗猪瘟/口蹄疫I型/口蹄疫A型病毒抗体*.*检测方法：应用多重诱捕阻断ELISA技术。用于检测和评估猪群免疫后猪瘟/口蹄疫I型/口蹄疫A型病毒抗体中和抗体水平。*.*、特点：同NPLA比较： 敏感度≥**.*%，特异性≥**.*%*.*、试剂盒内容：***.******.***、糖蛋白包被板 ***.******.***、**倍洗液 ***.******.***、血清稀释液 ***.******.***、酶结合抗体 ***.******.***、阳性血清对照 ***.******.***、阴性血清对照 ***.******.***、显色底物 ***.******.***、终止液 *.*.、操作步骤：***.******.***、实验前的准备及加样①使用前所有试剂盒组都必须恢复到室温（**℃-**℃），试剂应轻轻旋转或振荡均匀。②将**洗液进行**倍稀释③取出抗原反应板，在记录表上记录阴阳对照，样品的位置。 ④分别在每孔加人**μl稀释液，然后加阳性和阴性对照，待检血清各**μl，贴上封板膜，置**℃孵育*小时，或室温（**-**℃）过夜。***.******.***、洗板及加试剂①小心揭掉封板膜，弃去各孔中液体，拍净。每孔加满洗液***μl，洗*次，最后在吸水纸上拍净。②每孔加入酶结合物***μl，置室温孵育**分钟。③重复①.④每孔加入底物***μl，置室温孵育**分钟.***.******.***、读数每孔加入终止液**μl，轻振混匀，置酶标仪*** nm波长处测定各孔OD***值.*.*、结果判定***.******.***、试验结果同时符合下列条件，方为有效：阴性值＞*.*阳性值＜***.******.***.*、判定标准：①样品竞争值的计算方程式：样品竞争值（%PC）=【（阴性OD值-样品OD值）/（阴性OD值-阳性OD值）】×***②竞争值＜**判为阴性；没有保护力；竞争值≥**判为阳性；③ 如果结果可疑，检查样品有无污染或者重检；④ 如果重检结果依然可疑，应结合猪场流行病学情况，重新采样并检测。*.*.【有效期】到用户手上有效期应≥*个月。合同包*品目*口蹄疫AsiaI型LB-Elisa和品目* 口蹄疫A型LB-Elisa【规格】 **孔/块，**块酶标板/盒。【名称】口蹄疫亚洲Ⅰ型/A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒【作用和用途】 用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫亚洲Ⅰ型/A型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体检测。【试剂准备】*. 包被缓冲液（pH*.*）： 将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊*粒小心打开，将胶囊内粉末倒入***mL无离子水中溶解即可。*℃存放，*月内有效；*. 磷酸盐-吐温缓冲液（PBST）： 使用前，将本试剂盒配备的**倍PBST浓缩液用无离子水或蒸馏水稀释成*倍PBST（*份浓缩液加入**份水进行稀释）；*. 底物溶液： 取*片柠檬酸-磷酸盐片剂溶于*** mL无离子水中，溶化后，取** mL本溶液，再加*片邻苯二胺（OPD）片剂，充分溶解，分装，避光-**℃保存。【操作步骤】*. 用包被缓冲液稀释口蹄疫亚洲Ⅰ/A型病毒兔抗血清至工作浓度，在酶标板上加**µl/孔，振荡，封板或置湿盒内，室温过夜。*．抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应： 根据不同的需要，选择图*-*中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。图*为抗体滴度测定（定量）检测**份样品布局图；图*为抗体滴度测定（定量）检测**份样品布局图。稀释血清：以图*为例操作，在**孔血清/病毒抗原反应板上，以**µl /孔的量用PBST两倍连续稀释被检血清，从*:*至*:***。同时稀释阳性对照血清，从*:*～*:****；稀释阴性对照血清，从*:*～*:*；将病毒抗原用PBST稀释至工作浓度，以**µl /孔的量加入被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，*孔病毒抗原对照孔仅加入***µl /孔稀释至工作浓度的病毒抗原，振荡，*～*℃过夜。加入等量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，变为*:*～*:****。图* **孔酶标板检测**份样品布局图 ***************AS* *:*S*S*S*S*S*S*S*S*S**+*:**- *:*B*:** *:***:*C*:** *:** D*:** *:*** E*:*** *:***病毒抗原对照 F*:*** *:*** G*:*** *:**** H*:**** *:**** 图* **孔酶标板检测**份样品布局图 ***************AS* *:**S*S*S*S*S*S*S*S*S**+*:**- *:*B*:** *:***:*C*:** *:** D*:*** *:*** ES** *:**S**S**S**S**S**S**S**S**S***:***病毒抗原对照 F*:** *:*** G*:** *:**** H*:*** *:**** *. 用PBST连续洗酶标板*次，在洗水纸上甩干，再将抗原抗体混合液从抗原抗体反应板上按次序转移至酶标板上的对应孔，**µl/孔，封板，**℃ 温育**分钟。*. 同上洗板*次，甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释口蹄疫亚洲Ⅰ/A型病毒豚鼠抗血清至工作浓度，加**µl/孔，封板，**℃温育**分钟。*. 同上洗板*次，甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠血清­Ig G-辣根过氧化物酶结合物至工作浓度，加**µl/孔，封板，**℃温育**分钟。*. 同上洗板*次，加**µl/孔底物溶液（底物溶液务必要加*%双氧水（H*O*），每*ml加**µl本试剂盒配备的*%双氧水），**℃温育**分钟。每孔再加** µl 终止液终止反应，读取D***nm值）。【结果判定】*. 试验认可标准每块板设*孔病毒抗原对照，病毒抗原对照不加任何血清，直接用PBST稀释至工作浓度，与血清/病毒抗原复合物同步加入酶标板孔，**ul/孔。病毒抗原对照D***nm值应在*.*±*.*范围内。阳性对照抗体效价应在*∶****±*滴度以内，阴性对照血清抗体效价应*:*。*. 血清抗体效价的判定抗原对照是*孔，弃去最高和最低D***nm值，计算剩余*孔的平均D***nm值，再除以*，即**%对照值。该值即为临界值，表示阻断**％反应的对照D***nm值。以病毒抗原对照平均D***nm值的**%为临界值，被检血清D***nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。某份血清系列稀释中，阳性孔的最高稀释倍数为被检血清的抗体效价。若临界值处于两个稀释孔D***nm值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值，如处于*:**（反对数值为*.*）与*:***（反对数值为*.*）之间，则判定该份血清的抗体效价为*:**（反对数值为*.**）。定性检测中，两个重复孔只要有一孔为阳性孔，则抗体滴度判为*:***，两孔均为阳性孔，则判为抗体滴度*:***。抗体效价计算对照表抗体效价Log**（效价）对照计算抗体效价Log**（效价）对照计算抗体效价Log**（效价）对照计算*:**.**:***.**:****.**:**.***:***.***:****.***:**.**:***.**:****.**:***.***:***.***:****.***:***.**:****.**:******:***.***:****.***:*****.** *. 结果判定抗体效价大于或等于*:***判为口蹄疫亚洲Ⅰ/A型抗体阳性；*:**～*:***时，判为可疑；小于*:**，判定为阴性。可疑血清样品，可以重测，重测抗体效价大于或等于*:***，判为阳性，小于*:***判为阴性。*. ELISA抗体效价与免疫动物攻毒保护的关系 牛、羊：抗体效价≥*:***，**％保护；效价≤*:**，不保护；效价在*:**-**间，**％保护。口蹄疫亚洲Ⅰ/A型病毒抗原：-**℃以下保存；其余试剂盒组分放置*～*℃保存，*到用户手上有效期≥*个月。 福建省动物疫病预防控制中心